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              空腸彎曲菌的活化與保藏

              發布時間: 2021-03-26

              空腸彎曲菌(Campylobacter jejuni)是一種可以引起人類急性腸炎和食物中毒的人畜共患病原菌。該菌培養條件苛刻,生長需要特定的環境,菌株不易保存。通常在微需氧(5%氧氣、85%氮氣、10%二氧化碳)、42±1℃環境下,可存活4~5d,最后因培養基表面干燥而導致菌體干燥死亡。


              空腸彎曲菌的活化與保藏


              一、空腸彎曲菌的活化方法


              1.配制彎曲菌活化肉湯


              空腸彎曲菌的活化與保藏


              a. 將各成分溶于蒸餾水中,經過0.22μm濾膜過濾除菌。FBP 根據需要量現用現配,在-70℃儲存不超過3個月或-20℃儲存不超過1個月。


              b. 裂解脫纖維羊血提前從-70℃冰箱取出恢復至室溫。


              c. 稱取CM125布氏肉湯并溶解滅菌,滅菌后冷卻至室溫。每100ml基礎加入5ml裂解脫纖維羊血和0.5ml FBP溶液,分裝試管,即制備完成。

              空腸彎曲菌的活化與保藏


              2.肉湯培養

              從-70℃冰箱取出彎曲菌凍存甘油管,傾倒至彎曲菌活化肉湯中。置于厭氧培養罐中,加入微需氧產氣袋于42℃培養24h。


              3.平板培養

              取10ul肉湯培養物劃線至哥倫比亞血平板(PB003A),42℃微需氧培養44±4h,觀察菌落形態。典型菌落為灰色、扁平、濕潤有光澤,呈沿接種線向外擴散的傾向。

              空腸彎曲菌的活化與保藏


              4、菌株驗證

              通過菌落形態和生化實驗對菌株進行驗證,確認后進行菌株保藏。

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              二、空腸彎曲菌的保藏方法


              1.雙倍布氏肉湯甘油保存管制作:稱取5.62g CM125布氏肉湯干粉,溶于70ml蒸餾水、30ml甘油中,滅菌后冷卻至室溫,加入5ml裂解脫纖維羊血、0.5ml FBP溶液,混勻后分裝到凍存管中,每管1ml。


              空腸彎曲菌的活化與保藏


              2.?使用接種環刮取哥倫比亞血平板上的純菌落(盡可能多)至凍存管中,渦旋震蕩5s,于-70℃長期保存。



              三、注意事項


              01

              不建議使用磁珠管保藏彎曲菌,存活率不如甘油凍存管。

              02

              -20℃保存的效果不如-70℃冰箱,如果使用-20℃保存,應半年進行一次傳代。

              03

              如果短期保存,可將厭氧罐同試管/平板放入2-8℃冰箱,一星期內使用。



              空腸彎曲菌的活化與保藏

              MSS樣本管理系統掃碼裝置及專用凍存管


              空腸彎曲菌的活化與保藏

              MSS樣本管理系統軟件展示



              參考文獻:

              1.??????? 陳晶晶.彎曲菌腸炎[J].中華流行病學雜志, 1986, 7 (4) :245-249

              2.??????? 欒軍, 祝長青, 蔣原, et al..空腸彎曲菌保存方法的比較[J].口岸衛生控制, 2006, 12(4):15-17.

              3.??????? 欒軍, 祝長青, 蔣原, et al. 空腸彎曲菌選擇性增菌培養和分離方法的比較[J]. 中國人獸共患病學報, 2008, 24(002):117-119.

              4.??????? GB4789.9-2014 食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 空腸彎曲菌檢驗[S].




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